[发明专利]新构建的L－天门冬酰胺酶工程菌及其发酵培养

摘要

本发明是关于新构建的产L-天门冬酰胺酶重组菌及其发酵培养的方法。其中包括从产L-天门冬酰胺酶的菌株中分离染色体DNA，引物的设计，用PCR方法钓取酶的基因，酶基因的序列测定，重组质粒的构建，在几种宿主菌的表达，工程菌的发酵培养。本方法中，所得到的酶基因区别于已报道的该酶基因序列，并在个别氨基酸组成上也有差异；工程菌所采用的培养基便宜易得，发酵方法简单可行，每毫升发酵液可达120-228单位。

主权项

1.一种产L-天门冬酰胺酶的工程菌，其特征在于：1)该工程菌是由重组质粒pASN在三种宿主菌TG1、JM105、IM602分别转化而得，2)该工程菌在合适的培养基、合适的培养条件下，具有强的产L-天门冬酰胺酶的能力，其酶活力为120-228国际单位/毫升发酵液，3)该工程菌产生的酶不同于已有的大肠杆菌K-12，酶的分子量为144000，由四个相同亚基组成，亚基基因全长为1044bp，其中有33个碱基不同于大肠杆菌K-12，所编码的氨基酸中Ala27和Asn263有差别。