[发明专利]改进的差异展示聚合酶链反应方法无效
| 申请号： | 98112922.6 | 申请日： | 1998-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN1242431A | 公开（公告）日： | 2000-01-26 |
| 发明（设计）人： | 崔大祥;闫小君;苏成芝 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/10 |
| 代理公司： | 西北地区军队院校专利事务所 | 代理人： | 秦红 |
| 地址： | 710032 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 改进的差异展示聚合酶链反应方法,涉及基因的分子生物学,采用Liang与Pardee改进的第三代引物,建立了差异展示聚合酶链反应优化条件前五轮循环采用94℃35S,40℃2min,72℃30S,后35个循环采用94℃35S,55℃2min,72℃1min,最后在72℃延伸7min。并利用此方法以胃癌细胞株GC7901与胃粘膜细胞株GES－1为研究对象,分离出差异条带154条,对17个条带进行了测序,其中七个序列为新序列,在胃癌中呈高表达;设计了17对引物并运用于临床标本检测,筛选出5对引物,在胃癌组织中检出符合率为100%。总之,这7个序列及5对引物在胃癌诊断中具有重要开发价值及应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 改进 差异 展示 聚合 反应 方法 | ||
【主权项】：
1.改进的差异展示聚合酶链反应方法，其特征在于：采用Liang与Pardee改进的第三代DD-PCR引物，建立了差异展示聚合酶链反应的优化条件：5’端引物为8条，每条由13个碱基组成；3’端引物为3条，每条由16个碱基组成，上下游引物Tm值皆为38℃最适起始温度为54.5℃，循环条件为：前五轮循环采用94℃35S，40℃2min，72℃30S，后35个循环采用94℃35S，55℃2min，72℃1min，最后在72℃延伸7min。
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