[发明专利]抗HPV16E6核酶质粒及其在人乳头瘤病毒与肿瘤治疗中的应用

摘要

本发明公开了抗HPV16E6核酶质粒及其在人乳头瘤病毒与肿瘤治疗中的应用。该质粒可溶于水或TE等缓冲液配成溶液,或用冷冻干燥法制成干粉。该质粒能在RNA水平阻断HPV16E6基因的表达,阻断HPV相关肿瘤的细胞周期进展,诱导肿瘤细胞凋亡,部分逆转宫颈癌等肿瘤的恶性表型,并使肿瘤细胞易于被免疫细胞所杀伤。可用于人乳头瘤病毒及其相关肿瘤,如宫颈癌、口腔癌、喉癌等肿瘤的治疗与研究。

主权项

1.抗HPV16E6(人乳头瘤病毒16型E6基因)核酶的真核表达质粒，其特征在于：(1)设计：以HPV16基因序列为分析序列，采用计算机软件针对HPV16E6基因设计特异性锤头状核酶，该核酶的靶位点是E6基因上170位点。(2)人工合成了抗16HRzribozyme基因(各两条链)，并引入酶切位点，以便于克隆组装。A.5’CTAGATATCATGTACTGATGAGTCCGTGAGGACGAAAGTTGTTTGGGTAC3’XbaIKpnIB.5’CCAAACAACTTTCGTCCTCACGGACTCATCAGTACATGATAT3’(3)将抗16HRzribozyme基因装入原核表达质粒中，进行核酶的体外切割实验，将该核酶基因克隆于PcDNA3等真核表达载体中，构成抗HPV16E6核酶的真核表达质粒。可溶于水或TE等缓冲液配成溶液，或用冷冻干燥法制成干粉。